離心機(jī)分離實(shí)例一

    豬腎中微粒體膜組分粗品的分離

      儀器與試劑

      1.超速離心機(jī)（冷凍離心機(jī)）和轉(zhuǎn)頭

      2.勻漿緩沖液。50m mol/L Hepes/NaOH （pH7.4），0.33mol/L蔗糖。

       3.重懸緩沖液。10m mol/L Hepes/NaOH （pH7.4）。

      方法

       1.使用韋林?jǐn)嚢杵鳎ㄒ?℃預(yù)冷）在10倍體積（1L）的勻漿緩沖液（要求4℃預(yù)冷），中破碎100g豬腎皮質(zhì)。

        2.將勻漿物在離心機(jī)中于8000×g離心15min；

         3.小心地轉(zhuǎn)移出上清液，并將其在26000×g離心2min；

          4.用重懸緩沖液（要求4℃預(yù)冷）重懸離心得到的微體沉淀至蛋白質(zhì)終濃度約為10mg/ml。這樣得到的微粒體沉淀重懸物就是膜結(jié)合蛋白質(zhì)的來(lái)源